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IMMUNO 3.2.3 – La standardisation longitudinale et inter-instruments en cytométrie en flux

IMMUNO 3.2.3 – La standardisation longitudinale et inter-instruments en cytométrie en flux

Maîtrisez la standardisation des cytomètres pour des résultats fiables et reproductibles, d’un appareil à l’autre.
Immunologie
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Présentation

Cet atelier vous apprendra à standardiser et optimiser les réglages des cytomètres pour garantir des résultats fiables et reproductibles. En utilisant l’Attune NXT et le CytoFlex LX, vous serez guidé·e à travers les étapes clés de la caractérisation des instruments et de l’optimisation des PMTs. Vous réaliserez une standardisation multiparamétrique sur un panel de 10 fluorochromes et apprendrez à comparer les résultats entre différents appareils.

L’objectif est de maîtriser des protocoles de marquage reproductibles, transposables sur différents cytomètres.

Programme

La standardisation comprend deux étapes préliminaires fondamentales qui seront abordées lors de cet atelier :

  • la caractérisation des cytomètres (résolution, sensibilité),
  • les réglages et optimisation de la sensibilité des cytomètres.

 

L’atelier sera réalisé avec un Attune NXT ThermoFischer ScientificTM sur lequel nous établirons une ligne de base avec des billes de calibration qui permettent de calculer le bruit de fond électronique (electronic noise) et optique (B optical background).Nous établirons ensuite une « voltration » pour déterminer les voltages minimaux et optimaux à l’aide d’index de marquage (stain index). La série de réglage permettra aux utilisateurs de recycler les mêmes réglages de base (réglage de référence), de valider des concentrations d’anticorps monoclonaux et les indexes de marquage (stain index). Nous pourrons ainsi prouver la robustesse d’un panel au cours du temps et l’utilité d’ajouter un contrôle interne de standardisation sera également abordée.

Ce protocole de standardisation sera utilisé pour réaliser une standardisation entre un Attune NXT 4 lasers équipé (4 lasers) et le CytoFlex LX (5 lasers) sur un panel constitué de 10 fluorochromes.

A l’issue de cet atelier, les participants auront un aperçu des phases clés d’une standardisation et de la caractérisation des performances applicables à tout type de cytomètre. Les participants sauront optimiser les réglages des PMTs du cytomètre et les fixer dans le temps pour parvenir à un protocole standardisé de marquage en cytométrie multi-paramétrique.

Méthodologie

  • Une demi-journée de théorie
  • Une demi-journée de pratique

Objectif

  • La standardisation a pour but de produire des résultats fiables et reproductibles au cours du temps. En neutralisant la variabilité de sensibilité des instruments à chaque acquisition, la standardisation du cytomètre va permettre de réduire les écarts de mesure entre les expériences et ainsi comparer de manière plus fine les résultats au cours du temps (pourcentage, moyenne de fluorescence…). Cette méthodologie de standardisation peut être utilisée pour transposer des réglages d’un instrument à un autre et permettre ainsi la comparaison des résultats obtenus sur deux machines différentes.

Equipe pédagogique

Intervenants

  • Pierre GRENOT, Ingénieur d’étude INSERM, CIPHE, Marseille – Membre de l’AFC (Association Française de Cytométrie)
  • Julie CAZARETH, Ingénieur d’étude, UCA CNRS, IPMC Valbonne – Membre de l’AFC (Association Française de Cytométrie)

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Horaire

Durée

1 journée

De 9h15 à 17h

Lieu

Sur le campus BIOPARK (Gosselies)
(Plan d’accès au campus)

Admission

Pour qui

  • Responsables de projets, techniciens, technologues, chercheurs du secteur biotechnologique
  • Enseignants des Hautes Ecoles

Pré-requis

  • Niveau avancé en cytométrie multi-couleurs
  • Bonne connaissance des méthodologies de réglages des cytomètres (détecteurs, compensations, échantillons contrôles, etc…)
  • Ou avoir suivi les modules
    • IMMUNO-1.2 : Introduction à la cytométrie en flux et ses applications
    • IMMUNO-2.2 : Initiation pratique à la cytométrie en flux
    • IMMUNO-3.2 : Focus sur le phénotypage cellulaire par cytométrie en flux

Tarifs

Tarif plein :

  • 300€

Tarif réduit pour les Institutions publiques & ASBL :

  • 200€

Tarif réduit pour les doctorants & instit. hospitalières ULB :

  • 150€

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Contact

Garance VERMEYLEN

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